據美國食品藥品管理局消息，近日美國FDA更新進口預警措施(import alert)，其中，對我國8家企業的產品實施自動扣留，這8家企業的產品中，有2家都與磺胺類藥物殘留有關！
 

　　為什么水產品中會有磺胺類藥物？
 

　　磺胺類藥物(SAs，sulfonamides)屬于化學合成抗菌藥，具有抗菌譜廣、療效確定、方便安全的特點，是一類含有對氨基苯磺酰胺結構藥物的總稱。
 

　　磺胺藥曾廣泛應用于水產養殖中，在控制魚病傳染和感染方面起了很大作用，解決了不少水產養殖中存在的問題。對水產養殖中的細菌性豎鱗病、爛鰓病、弧菌病、癤瘡、赤鰭病、腸炎、鞭毛蟲病有良好的防治效果。
 

　　但是由于廣泛應用也帶來了許多新問題，如毒性反應、二重感染、細菌產生耐藥性以及危害人體健康等不良后果，特別是在濫用的情況下更為嚴重。因此，各國普遍限制將此類藥物用于肉食動物，并提出了嚴格的限量要求。
 

　　聯合國食品法典委員會(CAC)和許多國家(包括中國)規定，水產品和飼料中磺胺類藥物殘留總量以及磺胺二甲基嘧啶的量不超過0.1mg/kg。
 

　　目前應用于磺胺藥物殘留的分析方法有高效液相色譜法、氣相色譜法、液相-質譜聯用法、ELISA法等。
 

　　為了使得該項檢測更加方便快捷、精密度高，中檢維康自主研發了《免疫親和柱凈化-高效液相色譜法測定水產品中16種磺胺殘留物》的檢測方法，該方法樣品前處理步驟簡單，雜質干擾很小，檢測限低，并具有較好的回收率和精密度。

 

　　磺胺類藥物檢測方法
 

　　參考方法：
 

　　中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫局SN/T4057-2014《出口動物源性食品中磺胺類藥物殘留量的測定 免疫親和柱凈化-HPLC和LC-MS/MS法》
 

　　材料  ——  1、儀器
 

　　1、高效液相色譜儀
 

　　2、紫外檢測器
 

　　3、高速離心機
 

　　4、高速勻質器
 

　　5、泵流操作架
 

　　6、C-18柱(美國clover公司)
 

　　材料  ——  2、試劑
 

　　1、磺胺類藥物標準品(中國獸藥監察所)
 

　　2、Sepharose-4B(美國GE Healthcare)，
 

　　3、磺胺類藥物免疫親和柱(IAC-305北京中檢維康技術有限公司)
 

　　材料  ——  3、溶液的配置
 

　　1、pH7.4 PBS溶液：8.0 克NaCl + 2.90克Na2HPO4 12H2O + 0.24 克 KH2PO4 + 0.2克KCl  加990mL純水溶解，加純水至1升。
 

　　2、1.1%乙酸0.01M PBS溶液(%)：3.58 Na2HPO4+1.56 NaH2PO4，加970mL純水溶解，加11mL乙酸，加純水至1升。
 

　　3、16種磺胺類藥物儲備液：分別稱取5.0mg表1中的16種磺胺于50mL容量瓶中，用純甲醇定容至50mL；每種磺胺藥物的濃度為100ppm。
 

　　方法  ——   1、液相色譜條件
 

　　1、色譜柱：Cloversil-C18,4.6×250mm(5um)
 

　　2、流速：1.0mL/min
 

　　3、檢測器：紫外檢測器，波長270nm
 

　　4、進樣體積：50~100uL
 

　　方法  ——   2、樣品處理方法
 

　　1、準確稱取勻漿后樣品5.0 g，準確加入20.0mL 80%乙醇水溶液，高速勻質2min后，搖床震蕩提取30 min，然后3000 RPM離心5min。
 

　　2、準確移取吸取上清液5.0 mL，用45.0mL純水稀釋并定容至50 mL，然后用玻璃微纖維濾紙過濾，收集濾液于干凈燒杯中。
 

　　3、將上述濾液20.0 mL(0.5g樣品)，以1滴/秒的流速全部通過磺胺類藥物免疫親和柱，直至空氣流經親合柱，隨后用10.0mL純水以1-2滴/秒的流速淋洗親和柱，直至空氣流經親合柱。
 

　　4、將玻璃小管置于親和柱下，用2.0 mL甲醇以1滴/秒淋洗親和柱，將所有樣品淋洗液收集于玻璃測試管中，50 °C下氮氣濃縮吹干后用流動相定容至0.5 mL，供HPLC分析。
 

　　方法  ——   3、添加回收試驗
 

　　對空白魚肉，蝦肉和蟹肉樣品進行添加回收實驗，分別添加20ug/kg、50ug/kg和100ug/kg三個濃度水平，每個濃度做5組平行實驗，計算回收率和變異系數
 

　　結果與分析  ——   1、HPLC方法的建立
 

　　色譜條件的選擇：
 

　　測定磺胺藥物的反相HPLC流動相體系主要有：乙酸銨-乙腈/甲醇，磷酸鹽緩沖液-乙腈/甲醇，乙酸-乙腈/甲醇等，經反復對比試驗，本實驗選擇乙酸鹽溶液-甲醇流動相體系，SAs在較短的時間內分離效果最好，且柱壓較低。
 

　　SAs屬兩性化合物，因此通過簡單地調節流動相的pH值能夠改善分離和控制SAs的保留時間。試驗表明，在pH6.5～2.5范圍內，較低pH可明顯增加對SAs的分離能力(個別SAs順序可發生改變)，但保留時間延長。本試驗選擇1.1%乙酸0.01M PBS溶液-甲醇做流動相，并采取梯度洗脫的方式達到很好的效果，見圖1，為16種磺胺類藥物分別50ug/L的HPLC色譜圖。
 

　　圖1 16種磺胺類藥物分別50ug/L的HPLC色譜圖
 

　　結果與分析  ——   2、樣品添加回收率
 

　　魚肉，蝦肉和蟹肉樣品分別添加16種磺胺類藥物20ug/kg、50 ug/kg和100 ug/kg三個濃度水平回收率結果：樣品回收率在80%-106.5%之間，變異系數小于10%；
 

　　根據液相色譜靈敏度(10倍信噪比)和樣品提取方法計算，該方法樣品檢測靈敏度為20ug/kg。魚肉樣品添加20ug/kg 16種磺胺液相色譜檢測色譜圖見圖2。
 

　　魚肉樣品添加16種磺胺20ug/kg液相色譜檢測色譜圖

 

　　魚肉樣品中16種磺胺類藥物加標回收率和精密度(n=5)

 

　　蝦肉樣品中16種磺胺類藥物加標回收率和精密度(n=5)

 

　　蟹肉樣品中16種磺胺類藥物加標回收率和精密度(n=5)